【評(píng)價(jià)原理】
皮脂腺是雄激素的來源和目標(biāo)組織，皮脂腺中產(chǎn)生脫氫表雄酮，經(jīng)過一系列的酶催化轉(zhuǎn)化為最活躍的睪酮和5α-雙氫睪酮，它們能夠刺激皮脂腺細(xì)胞的增殖分化（未分化的幼稚細(xì)胞首先進(jìn)行增殖，部分子細(xì)胞形成脂滴，并向腺胞中心移動(dòng)，逐漸發(fā)育分化為能儲(chǔ)積并分泌脂質(zhì)的成熟的皮脂腺細(xì)胞），也能刺激脂質(zhì)的合成。本實(shí)驗(yàn)通過睪酮誘導(dǎo)脂質(zhì)合成，通過尼羅紅染色法來檢測(cè)皮脂腺細(xì)胞脂質(zhì)的積累，從而判斷供試品是否具有控油功效。
【實(shí)驗(yàn)方法】
收集生長(zhǎng)狀態(tài)良好的SZ95細(xì)胞，經(jīng)胰酶消化離心后，用DMEM 完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10^5 個(gè)/mL，在6 孔板加入無菌的細(xì)胞爬片，每孔均勻接種2 mL細(xì)胞懸液，隨后將其放置在37℃，5％CO2 培養(yǎng)箱中孵育。待細(xì)胞貼壁后，空白組和模型組更換為新鮮培養(yǎng)基，受試物組更換為含受試物的新鮮培養(yǎng)基，用睪酮處理以誘導(dǎo)脂質(zhì)合成。隨后將其放置在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育24 h。待孵育24 h后，棄去培養(yǎng)基，用PBS 洗滌2次，室溫下4％多聚甲醛固定10 min。固定后，用尼羅紅染液（100 μg / mL）染色，并在37℃培養(yǎng)箱中孵育10 min，吸去染液，隨后用PBS 清洗3 ~ 5 次，輕輕取出細(xì)胞爬片將其放置于載玻片上，并均勻滴加10μL 抗熒光猝滅封片劑。熒光顯微鏡下觀察染色情況，具有強(qiáng)橙紅色熒光的細(xì)胞是富含脂質(zhì)的陽(yáng)性細(xì)胞。尼羅紅染色檢測(cè)SZ95細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脂質(zhì)積累。
【評(píng)價(jià)指標(biāo)】SZ95 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脂質(zhì)積累
【結(jié)果展示】（展示圖片僅供參考，實(shí)際實(shí)驗(yàn)組別依據(jù)合同而定）
圖1 細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累表型圖
【評(píng)價(jià)結(jié)論】
供試品組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量與模型對(duì)照組相比減少，初步證明供試品具有控油功效。
【參考文獻(xiàn)】
[1]劉武陽(yáng).黃連活性成分分離及抑制人皮脂腺細(xì)胞雄性激素合成機(jī)制研究[D].西南大學(xué)2020
浙公網(wǎng)安備 33010802003447號(hào)