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利用細胞評價供試品增強皮膚屏障功效

【評價原理】

皮膚屏障主要由角質(zhì)層、結(jié)構(gòu)性脂類和皮膚脂膜構(gòu)成,皮膚屏障功能是皮膚的基本生理功能,包括滲透屏障,抗氧化屏障,抗菌屏障,UV屏障,機械屏障等,起保護機體內(nèi)各組織器官免受外界有害侵襲以及保持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的作用。內(nèi)外源壓力條件,如衰老、炎癥、UV等都會導致角質(zhì)層的角質(zhì)細胞以及各種脂質(zhì)的組分、結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,從而導致皮膚屏障功能的降低。

與皮膚屏障功能密切相關(guān)的蛋白有FLG(filaggrin絲聚合蛋白)、TGM1(transglutaminase-1 轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶1)等。FLG是一種重要的表皮結(jié)構(gòu)蛋白,對角質(zhì)層的結(jié)構(gòu)和功能起著至關(guān)重要的作用。FLG及其降解產(chǎn)物有助于皮膚水化、pH平衡、表皮屏障完整性和微生物防御。FLG缺乏會造成自然保濕因子(NMF)水平下降,導致角質(zhì)層水合作用減少,經(jīng)表皮水分流失(TEWL)增加,皮膚干燥。TGM1基因是表皮表達的三種TGM的主要亞型,TGM1編碼與膜相連的鈣依賴性硫醇酶,TGM 是一種催化?;D(zhuǎn)移反應的酶,為球狀單體蛋白,能夠催化肽鏈上谷氨酰殘基的γ-?;w與Lys 殘基的ε-氨基反應,生成ε- ( γ-Gln)-Lys 肽鍵, 從而使蛋白分子間或分子內(nèi)發(fā)生交聯(lián),這種交聯(lián)較穩(wěn)定,可以抵抗蛋白酶的水解作用,是角質(zhì)形成細胞終末分化組成角質(zhì)包膜的關(guān)鍵步驟,是皮膚屏障功能的物質(zhì)基礎(chǔ)。

將受試物作用于永生化角質(zhì)形成細胞HaCaT后檢測上述三種基因及蛋白的表達,可以評估供試品增強皮膚屏障的功能。

【實驗方案】

接種6孔平板: 6×105個細胞/孔培養(yǎng)(37℃、5%CO2、24h)觀察細胞貼壁以后,去除培養(yǎng)液,用1mL D-Hanks輕柔沖洗細胞一次或兩次。給藥,分別設(shè)置空白組、陽性對照組(加50和100μm的WY14643,WY-14643是一種過氧化物酶體增殖物激活受體PPARα激動劑,其對角質(zhì)形成細胞通透性屏障穩(wěn)態(tài)相關(guān)功能如上調(diào)表皮分化相關(guān)分子和脂質(zhì)合成的有益作用已被證實),按上述條件培養(yǎng)24h。提取總RNA,使用cDNA提取試劑盒,合成cDNA,最后利用RT-PCR進行檢測。

評價指標

TGM和FLG基因的表達

【結(jié)果展示】

1、TGM和FLG基因的表達柱狀圖(略)

評價結(jié)論

1、供試品可有效促進TGM和FLG基因的表達,說明該供試品具有增強皮膚屏障功效。


參考文獻:

[1] Anna D?bińska, Matteo Megna, New Treatments for Atopic Dermatitis Targeting Skin Barrier Repair via the Regulation of FLG Expression[J]. J Clin Med. 2021,10(11): 2506.

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